Kontaminacija staničnih kultura lako može postati najčešći problem u laboratorijima za stanične kulture, ponekad uzrokujući vrlo ozbiljne posljedice.Zagađivači stanične kulture mogu se podijeliti u dvije kategorije, kemijski zagađivači kao što su nečistoće medija, seruma i vode, endotoksini, plastifikatori i deterdženti i biološki zagađivači kao što su bakterije, plijesni, kvasci, virusi, mikoplazma križne infekcije.Kontaminiran drugim staničnim linijama.Iako je nemoguće potpuno eliminirati kontaminaciju, njezina se učestalost i ozbiljnost mogu smanjiti temeljitim razumijevanjem njezina izvora i pridržavanjem dobrih aseptičkih tehnika
1. Ovaj odjeljak opisuje glavne vrste biološke kontaminacije:
Bakterijska kontaminacija
Kontaminacija plijesni i virusima
Kontaminacija mikoplazmom
Kontaminacija kvascem
1.1 Bakterijska kontaminacija
Bakterije su velika skupina sveprisutnih jednostaničnih mikroorganizama.Obično imaju samo nekoliko mikrona u promjeru i mogu biti u različitim oblicima, od sfera do šipki i spirala.Zbog svoje sveprisutnosti, veličine i brze stope rasta, bakterije su, uz kvasce i plijesni, najčešći biološki kontaminanti u kulturi stanica.
1.1.1 Detekcija bakterijske kontaminacije
Bakterijska kontaminacija se lako otkriva vizualnim pregledom kulture unutar nekoliko dana nakon što je postala zaražena;
Zaražene kulture obično izgledaju mutno (tj. mutno), ponekad s tankim slojem na površini.
Često se susreću i nagli padovi pH vrijednosti medija kulture.
Pod mikroskopom male snage, bakterije izgledaju kao sićušne, pokretne granule između stanica, a promatranje pod mikroskopom velike snage može razlučiti oblike pojedinačnih bakterija.
1.2 Kontaminacija plijesni i virusima
1.2.1 Kontaminacija plijesni
Plijesni su eukariotski mikroorganizmi iz carstva gljiva koji rastu u obliku višestaničnih niti koje se nazivaju hife.Vezivne mreže ovih višestaničnih filamenata sadrže genetski identične jezgre koje se nazivaju kolonije ili micelij.
Slično kontaminaciji kvascima, pH kulture ostaje stabilan tijekom početne faze kontaminacije, a zatim brzo raste kako kultura postaje ozbiljnije zaražena i postaje mutna.Pod mikroskopom, micelij je obično nitast, ponekad kao guste nakupine spora.Spore mnogih plijesni mogu preživjeti u ekstremno teškim i negostoljubivim okruženjima tijekom svoje faze mirovanja i aktiviraju se samo kada se naiđu na odgovarajuće uvjete za rast.
1.2.2 Kontaminacija virusom
Virusi su mikroskopski infektivni agensi koji preuzimaju strojeve stanice domaćina za reprodukciju.Njihova izuzetno mala veličina otežava ih otkrivanje u kulturi i uklanjanje iz reagensa koji se koriste u laboratorijima za kulturu stanica.Budući da većina virusa ima vrlo stroge zahtjeve za svoje domaćine, oni obično ne utječu nepovoljno na kulture stanica drugih vrsta osim domaćina.
Međutim, uporaba staničnih kultura zaraženih virusom može predstavljati ozbiljan rizik za zdravlje laboratorijskog osoblja, osobito ako se u laboratoriju uzgajaju ljudske stanice ili stanice primata.
Virusna infekcija u staničnim kulturama može se otkriti elektronskom mikroskopijom, imunobojanjem sa setom antitijela, ELISA-om ili PCR-om s odgovarajućim virusnim početnicama.
1.3 Kontaminacija mikoplazmom
Mikoplazme su jednostavne bakterije bez staničnih stijenki i smatraju se najmanjim organizmima koji se sami razmnožavaju.Zbog njihove iznimno male veličine (obično manje od 1 mikrona), mikoplazme je teško detektirati sve dok ne dosegnu iznimno veliku gustoću i uzrokuju propadanje staničnih kultura;Do tada obično nema očitih znakova infekcije.
1.3.1 Detekcija kontaminacije mikoplazmom
Neke mikoplazme koje sporo rastu mogu postojati u kulturama bez uzroka smrti stanica, ali mijenjaju ponašanje i metabolizam stanica domaćina u kulturama.
Kroničnu infekciju mikoplazmom može karakterizirati smanjena stopa proliferacije stanica, smanjena gustoća zasićenja i aglutinacija u suspenzijskoj kulturi.
Međutim, jedini pouzdani način otkrivanja kontaminacije mikoplazmom je redovito testiranje kulture pomoću fluorescentnog bojenja (npr. Hoechst 33258), ELISA, PCR, imunološkog bojenja, autoradiografije ili mikrobnog testiranja.
1.4 Kontaminacija kvascem
Kvasci su jednostanični eukarioti iz carstva gljiva, veličine od nekoliko mikrona (obično) do 40 mikrona (rijetko).
1.4.1 Detekcija kontaminacije kvascima
Kao i kod bakterijske kontaminacije, kulture kontaminirane kvascima mogu postati mutne, osobito ako je kontaminacija u poodmakloj fazi.pH kultura kontaminiranih kvascem mijenja se vrlo malo dok kontaminacija ne postane ozbiljnija, u kojoj fazi pH obično raste.Pod mikroskopom, kvasac izgleda kao pojedinačne jajolike ili sferne čestice i može proizvoditi manje čestice.
2.Unakrsna infekcija
Iako nije tako česta kao mikrobna kontaminacija, ekstenzivna unakrsna kontaminacija mnogih staničnih linija s HeLa i drugim brzorastućim staničnim linijama jasno je definiran problem s ozbiljnim posljedicama.Nabavite stanične linije od renomiranih staničnih banaka, redovito provjeravajte karakteristike staničnih linija i koristite dobre aseptičke tehnike.Ovi postupci pomoći će vam da izbjegnete unakrsnu kontaminaciju.DNK otisci prstiju, kariotipizacija i izotipizacija mogu potvrditi postoji li unakrsna kontaminacija vaše stanične kulture.
Iako nije tako česta kao mikrobna kontaminacija, ekstenzivna unakrsna kontaminacija mnogih staničnih linija s HeLa i drugim brzorastućim staničnim linijama jasno je definiran problem s ozbiljnim posljedicama.Nabavite stanične linije od renomiranih staničnih banaka, redovito provjeravajte karakteristike staničnih linija i koristite dobre aseptičke tehnike.Ovi postupci pomoći će vam da izbjegnete unakrsnu kontaminaciju.DNK otisci prstiju, kariotipizacija i izotipizacija mogu potvrditi postoji li unakrsna kontaminacija vaše stanične kulture.
Vrijeme objave: 1. veljače 2023